液相色譜柱是由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70Kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應,不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。
液相色譜柱日常使用保養(yǎng):
· 使用預柱保護分析柱(硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)
· 注意色譜的pH范圍,大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-8
· 避免流動相組成及極性的劇烈變化
· 使用HPLC級試劑,流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理
· 如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應在實驗完畢將柱子沖洗干凈并保存在乙-腈中
· 壓力升高是需要更換預柱的信號
· 確認流動相中緩沖鹽的溶解性
· 確認樣品在流動相中的溶解性
· 避免壓力的突變
液相色譜柱的保存:
1.反向色譜柱實驗后的保養(yǎng):
用含鹽緩沖液或流動相后,用10%甲醇/水沖洗30分鐘,洗去色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不要用純水沖洗塔,應在水中加入10%的甲醇,以防止填料倒塌。
2.長期保存色譜柱:
例如,色譜柱若要長期保存,必須保存在合適的溶劑中,反相柱可以儲存在純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存在嚴格脫水的純正己烷中。離子交換柱可以儲存在水中(含防腐劑、硫柳汞),并在室溫下堵塞插頭。
液相色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。